Yeast Nucleoside diphosphokinase試劑催化腺苷三磷酸（ATP）和核苷二磷酸（NDP）之間高能磷酸基團(tuán)的

轉(zhuǎn)移，在體內(nèi)負(fù)責(zé)合成除ATP以外的其它核糖核苷酸的生成。由二核糖核苷酸生成三核糖核苷酸：(d)XDP+(d)YTP?(d)XTP+(d)

YDP。另外,該酶還具有NDP激酶活性和蛋白磷酸轉(zhuǎn)移酶活性,并參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。該蛋白來源于S. cerevisiae，

通過重組表達(dá)而得。

組分

組分名稱數(shù)量

Yeast Nucleoside diphosphokinase

(20 U/μl)50 μl

10xNDPK Buffer1 ml

活性定義

每單位指37度條件下，在ATP存在條件下每分鐘轉(zhuǎn)化1.0 μmol TDP到TTP所需酶量。該酶比活為1X10e5 U/mg，制品濃度約200 ng/μl。

儲存

-20℃可保存3年。

10xNDPK Buffer

200mM HEPES,pH7.5

1M Potassium glutamate

100 mM Magnesium acetate

50mM DTT

Yeast Nucleoside diphosphokinase試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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