T4 DNA Polymerase (exo-)試劑是來源于T4噬菌體的DNA聚合酶，又名T4 gp43，在T4噬菌體DNA復(fù)制過程中引導(dǎo)先導(dǎo)鏈和滯后鏈沿5'-3'

方向延伸。通過對第219個氨基酸進行點突變修飾D219A，使得該酶失去 3'-5' 外切核酸酶的活性，但保留了聚合酶活性，

且該酶的聚合酶活性強于DNA 聚合酶 I。 與 DNA 聚合酶 I 不同，T4 DNA 聚合酶不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。

組分

組分名稱250U

T4 DNA Polymerase exo- (5 U/μl)50 μl

10xT4 DNA Pol Buffer1 ml

活性定義

一個活力單位即在37°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

儲存

-20℃可保存3年。

10X T4 DNA Pol Buffer

200 mM Tris-HCl，pH7.9

500 mM NaCl

100 mM MgCl2

5 mM DTT

1 mg/ml BSA

熱失活

75°C， 20 min

T4 DNA Polymerase (exo-)試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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