細(xì)胞名稱：A7r5大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)前的工作準(zhǔn)備充分

包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗(yàn)等等。

玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細(xì)胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。

試劑配置。細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

無菌檢驗(yàn)。主要采用過濾除菌：如抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉等。有些可以采用高壓滅菌，如 PBS、D-Hank's等。

試劑分裝保存包括營養(yǎng)液、血清等。

血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青m素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細(xì)胞培養(yǎng)）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS1099P小鼠血管外膜成纖維原代細(xì)胞

YS1100P小鼠大隱靜脈平滑肌原代細(xì)胞

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YS1102P小鼠大隱靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞

YS1103P小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞

YS1104P小鼠滑膜原代細(xì)胞

YS1105P小鼠骨骼肌原代細(xì)胞

YS1106P小鼠真皮成纖維原代細(xì)胞

YS1107P小鼠軟骨原代細(xì)胞

YS1108P小鼠破骨原代細(xì)胞

YS1109P小鼠前脂肪原代細(xì)胞

YS1110P小鼠成骨原代細(xì)胞

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YS1113P小鼠腦膜原代細(xì)胞

YS1114P小鼠海馬神經(jīng)元原代細(xì)胞

YS1115P小鼠腦微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

YS1116P小鼠腦成纖維原代細(xì)胞

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YS1122P小鼠角膜成纖維原代細(xì)胞

YS1123P小鼠睪丸支持原代細(xì)胞

YS1124P小鼠腹腔巨噬原代細(xì)胞

YS1125P小鼠心臟微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

YS1126P小鼠肝外膽管上皮原代細(xì)胞

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YS1128P小鼠肝枯否原代細(xì)胞

YS1129P小鼠胚胎成纖維原代細(xì)胞

YS1130P小鼠脂肪間充質(zhì)干原代細(xì)胞

YS1131P小鼠神經(jīng)干原代細(xì)胞

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