A-498（ATCCHTB-44）源于52歲女性腎透明細(xì)胞癌患者，由AaronsonS建立，屬上皮樣貼壁細(xì)胞，倍增時(shí)間約33至60小時(shí)。以下為標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)范。
培養(yǎng)體系。培養(yǎng)基采用MEM（含NEAA）或DMEM，加10%優(yōu)級(jí)胎牛血清及1%青霉素-鏈霉素雙抗。培養(yǎng)環(huán)境嚴(yán)格控制在37℃、5%CO?、飽和濕度條件下。密集培養(yǎng)時(shí)胞內(nèi)可見巨大空泡，屬正常特性，無(wú)需干預(yù)。
傳代操作。細(xì)胞密度達(dá)80%至90%時(shí)啟動(dòng)傳代，推薦比例1:2至1:4，傳代建議1:2。棄舊液后以不含鈣鎂的PBS潤(rùn)洗一至兩次，加0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液1毫升，37℃消化1至2分鐘，鏡下見細(xì)胞變圓、間隙增大即終止，輕拍瓶壁后加含血清培養(yǎng)基中止消化。1000RPM離心4分鐘，棄上清，新鮮培養(yǎng)基重懸后均勻分瓶，補(bǔ)足培養(yǎng)基后靜置培養(yǎng)。消化時(shí)間需嚴(yán)格把控，過(guò)度消化將直接損傷細(xì)胞活性。
換液與凍存。每周換液2至3次。凍存采用梯度降溫法：凍存液配方為90%培養(yǎng)基加10%DMSO，或55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基加40%FBS加5%DMSO，細(xì)胞濃度不低于1×10?/mL。經(jīng)程序降溫盒-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存，轉(zhuǎn)入后務(wù)必復(fù)蘇一管驗(yàn)證活性。
污染防控。支原體、細(xì)菌、真菌檢測(cè)均為陰性方可使用。全程嚴(yán)格無(wú)菌操作，定期檢測(cè)支原體，必要時(shí)以雙抗預(yù)防細(xì)菌污染。
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