如何選擇二抗

二抗：二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點使得其在

免疫學(xué)實驗中得以應(yīng)用廣泛，如western blot（通過與特異性抗體結(jié)合來鑒定蛋白質(zhì)），ELISA（以耦聯(lián)有酶的抗體或抗原為標(biāo)記來檢測特異

性的蛋白質(zhì)，尤其是相應(yīng)的抗原或抗體），免疫組織化學(xué)（檢測組織中的特異性抗原），免疫細(xì)胞化學(xué)（通過免疫學(xué)方法檢測細(xì)胞的抗原

組成），流式細(xì)胞術(shù)（通過檢測激光所激發(fā)熒光來鑒定分離不同類型的細(xì)胞）及免疫沉淀（通過抗原與抗體的特異性結(jié)合作用來分離相應(yīng)

抗原）。

1.二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體均具有特異性，因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對每一個一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時間和費用

；此外，一個一抗分子可以同時結(jié)合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。二抗可以耦聯(lián)有幾種不同的標(biāo)記，可以是酶

，熒光素，或生物素。

 二抗的種屬來源

一般來說，不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別。

然而在一些特殊的實驗里，如雙標(biāo)實驗里，如果其中一個一抗是山羊來源的，一個是小鼠來源的，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的

二抗，這時候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。選擇相應(yīng)的驢來源的二抗，就非常適合做類似雙標(biāo)的免疫實驗。雙標(biāo)得2個都抗才行，

故選擇第3個種源的抗體。

2.選擇哪種形式的二抗，是整個IgG分子，F(xiàn)(ab')2片段，還是Fab片段？

整個IgG分子：此種抗體適用于多數(shù)情況。

F(ab')2片段：該種抗體是由兩個靠二硫鍵連接的用于結(jié)合抗原的Fab片段組成，這些抗體用在特定的情況中，如需要避免抗體與具有Fc受體

的細(xì)胞結(jié)合的情況。

Fab片段：它們只有一個結(jié)合位點，一般用來封閉內(nèi)源性免疫球蛋白。

3.二抗的耦聯(lián)標(biāo)記

一般來講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC, RRX, TR, PE）

和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于western blot和ELISA，常用的二抗是酶標(biāo)二抗，而細(xì)胞或組織標(biāo)記實驗（

細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)）中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的

二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號，可以使用biotin/avidin檢測系統(tǒng)。在一些熒光檢測方案中，則需要選擇不同的熒光標(biāo)記；

而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。